Li CM, Miao Y, Lingeman RG, et Al.

PLoS One. 2016 Dec 30; 11(12): e0169259

doi: 10.1371/journal.pone.0169259

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28036377

 

Peneliti menjelasakan sebuah metode yang cepat dalam melakukan purifikasi multiprotein replikasi DNA kompleks menggunakan free flow electrophoresis (FFE). Secara khusus, peneliti menerapkan FFE untuk melakukan purifikasi DNA synthesome sel manusia yang merupakan multiprotein kompleks yang dapat membawa keluar semua tahapan proses replikasi DNA in vitro menggunakan plasmid yang mengandung SV 40 asal dari replikasi DNA dan protein virus antigen tumor (T-antigen) yang besar. DNA synthesome asli yang terisolasi dapat digunakan dalam mempelajari mekanisme replikasi DNA yang dilakukan mamalia dan bagaimana obat anti kanker mengganggu replikasi DNA atau proses perbaikan. Sebagian ekstrak yang dipurifikasi dari sel HeLa difraksinasi menjadi aslinya, pemisahan berdasarkan cairan oleh FFE. Analisis dot blot menunjukkan koelusi beberapa protein yang diidentifikasi sebagai bagian dari DNA synthesome, termasuk proliferating cell nuclear antigen (PCNA), DNA topoisomerase I (topo I), DNA polimerase � (Pol �), DNA polimerase � (Pol �), protein replikasi A (RPA), dan faktor replikasi C (RFC). Sebelumnya, telah diidentifikasi protein DNA synthesome yang berkoelusi dengan T-antigen dependent dan aktivitas DNA polemerase dengan spesifikasi SV40 pada fraksi FFE yang sama. Gel asli  menun jukkan PCNA multiprotein mengandung migrasi kompleks dengan mobilita s relatif yang jelas dalam rentang megadalton. Ketika PCNA dipotong dari gel aslinya, analisis massa spektometri berurutan mengidentifikasi 23 DNA synthesome yang diketahui berhubungan dengan protein atau sub unit  protein.


Translate

English French German Italian Portuguese Russian Spanish